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    ArcticExpress (DE3)感受態細胞

    ArcticExpress (DE3)感受態細胞

    簡要描述:ArcticExpress (DE3)感受態細胞
    ArcticExpress (DE3)來源于E. coli B,為Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促進表達蛋白的穩定。

    更新時間:2022-01-20

    廠商性質:生產廠家

    瀏覽次數:1980

    詳情介紹
    品牌其他品牌貨號BFNC86090
    規格10x100ul/50x100ul供貨周期現貨
    主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

    ArcticExpress (DE3)感受態細胞



    產品規格CAT#: BFNC86090-01(10×100ul)/BFNC86090-02(50×100ul)


    ArcticExpress (DE3):                                       100μl/支

    pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

    保存條件(保質期):                                   -80℃(6個月)



    基因型

    E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]





    產品說明


    ArcticExpress (DE3)來源于E. coli B,為Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促進表達蛋白的穩定。ArcticExpress (DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區,使得ArcticExpress (DE3)菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。ArcticExpress (DE3)菌株具有四環素,慶大霉素抗性,endA1突變有利于質粒DNA的穩定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3)可以表達適應低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現出較高活性,在ArcticExpress (DE3)細胞中表達時,可降低重組蛋白包涵體的形成,增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性,比傳統的原核表達伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優異的促融性能。

    青旗生物生產的ArcticExpress (DE3)感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率達108cfu/μg DNA。



    操作方法

    1. ArcticExpress (DE3)感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質粒,并用手bo打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

    2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

    3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

    4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上((平板中務必同時含有40ug/ml的慶大霉素和轉化質粒本身的篩選抗生素;若質粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

    5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


    ArcticExpress (DE3)感受態細胞



    IPTG配制:

        Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

        by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.





    注意事項

    1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

    2. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。除復蘇培養基為無抗生素外,其余所用培養基、培養液均應含有40ug/ml的慶大霉素,以防質粒丟失。

    3. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。

    4. ArcticExpress (DE3)感受態細胞具有四環素、慶大霉素抗性,不可用于具有四環素、慶大霉素抗性質粒的轉化。




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