分享感受態(tài)細胞的兩種制作方法

　　感受態(tài)細胞的理化方法誘導(dǎo)細胞，吸收周圍環(huán)境中的DNA分子，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)。目前感受態(tài)細胞的主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復(fù)。

 

　　感受態(tài)細胞的制作方法：

　　CaCl2法：

　　1、將快速生長的大腸桿菌置于經(jīng)低溫（0℃）預(yù)處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導(dǎo)細胞成為感受態(tài)細胞

細胞壁通透性發(fā)生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復(fù)合物。

聯(lián)合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細菌，則可使轉(zhuǎn)化率提高100～1000倍。

　　2、此時，將該體系轉(zhuǎn)移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結(jié)構(gòu)會發(fā)生劇烈擾動，并隨機出現(xiàn)許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復(fù)制、表達，實現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。

　　3、將轉(zhuǎn)化后的細胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。

 

　　電轉(zhuǎn)法：

　　電擊法不需要預(yù)先誘導(dǎo)細菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉(zhuǎn)化率最高能達到109~1010轉(zhuǎn)化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受