酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)

一、   酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)液體樣本：

1.    血清：PP管（不含熱原和內(nèi)毒素）收集全血，室溫自然凝固20-30分鐘，或4℃過夜，分離出血清，（適當(dāng)傾斜離心管以擴(kuò)大液面的橫截面，使血清能更大程度分離出來）。4℃ 2000轉(zhuǎn)/分離心20-30分鐘，將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離，收集上清，立即進(jìn)行測定。如暫不檢測可將收集的血清分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血清樣本應(yīng)注意避免溶血和細(xì)菌污染。

2.    血漿：使用抗凝管或加入抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉或肝素）的PP管收集全血，混合10-20分鐘，4℃ 2000轉(zhuǎn)/分，離心20-30分鐘，收集上清，立即進(jìn)行測定，如暫不檢測可將收集的血清分裝保存于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3.    尿液、胸腹水、腦脊液、母乳、唾液：用無菌管收集樣本，4℃ 2000轉(zhuǎn)/分，離心20-30分鐘。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

4.    細(xì)胞培養(yǎng)上清：

1)        胞外：無菌管收集，4℃ 2000轉(zhuǎn)/分，離心20-30分鐘，除去細(xì)胞碎片和雜質(zhì)，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2)        胞內(nèi)：加入裂解液，或用pH7.2-7.4的PBS稀釋細(xì)胞懸液，使細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右，通過反復(fù)凍融（如果反復(fù)凍融，破碎效果不好，可采用超聲波破碎），使細(xì)胞膜破壞并釋放出細(xì)胞內(nèi)成分，2000轉(zhuǎn)/分，離心20-30分鐘，收集上清。

二、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)固體樣本：

1.    組織標(biāo)本：標(biāo)本采集后用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩Ｊ褂脮r(shí)切割標(biāo)本，稱取1g左右組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。4℃ 2000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2.    植物標(biāo)本：取0.1g新鮮植物組織樣本，液氮中充分研磨；加入樣品體積9倍的提取液（pH7.2-7.4左右的PBS），4℃ 8000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，取上清并暫時(shí)保存于4℃待用。如需精確提取，可在液氮研磨后加入1ml的提取液（80%甲醇）, -20℃過夜后再4℃ 8000轉(zhuǎn)/分，離心1小時(shí)，取上清；上清液過C-18固相萃取柱，過柱后的樣本真空干燥或氮?dú)獯蹈桑４鎮(zhèn)溆茫簧蠘忧凹尤雙H7.2-7.4左右的PBS緩沖液（1ml定容）。混勻后室溫放置30分鐘，4℃8000轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘，取上清并暫時(shí)保存于4℃待用。

3.    土壤：稱取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，充分混勻。4℃ 2000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。